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柳絮
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同源重組克隆時,我設計的引物同源臂序列的GC含量超過了60%,會有很大的影響嗎?我需要克隆到一個特定的位點,所以同源序列只能是唯一的
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南京諾唯贊生物科技有限公司先生
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克隆效率和同源臂GC含量、載體和片段投入量以及感受態細胞效價都有關系,同源臂GC含量超過60%會使克隆效率降低。如果不能換克隆位點的話,建議:盡量提高線性化載體和插入片段的濃度,使用效價高的感受態細胞來進行嘗試;如果您使用的是C112,可以把重組反應條件改為50度5分鐘,如果您使用的是C115,做單片段克隆的話可以把重組反應時間延伸至30min。
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孫瑞斌
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CUT&Tag適技術用于植物嗎?
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南京諾唯贊生物科技有限公司先生
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您好,植物需要制備成原生質體。
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羅仁禮
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克隆一直連不上,用了phanta高保真擴增,準備連接T載體,請問怎么用普通taq酶給平末端產物加A尾巴呢? 可以直接在PCR再延伸的步驟時加入taq酶嗎?
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南京諾唯贊生物科技有限公司先生
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您好,高保真酶擴增完的產物不帶A尾,可嘗試使用Vazyme無縫克隆產品C112/C113/C115;若后面做TA克隆可用普通的Taq酶進行加A反應。 具體加A方法:在10μl體系中,加入純化后的PCR產物1-7μl,同時加入1μl 10×Taq Buffer(含MgCl2)、0.5μl 10mM dNTPs、0.2μl Taq DNA聚合酶(不加引物),最后用超純水補足體系,72℃反應10-15min即可。
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鄔俊
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TruePrep Index Kit V2 for Illumina 是否可以和其它公司的DNA建庫試劑盒兼容使用(譬如KAPA的HyperPrep,NEB的NEBNext Ultra等)?
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南京諾唯贊生物科技有限公司先生
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您好,我們并未使用過其他公司的試劑盒進行測試。根據實驗需求,推薦選用Vazyme轉座酶DNA建庫試劑盒TD501-TD503進行后續實驗。
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馮賀雄
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clonexpress一步法定向克隆無縫克隆試劑盒可以把插入片段分成兩段連接嗎,我的整段擴增不出來,中間引物要如何設計
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南京諾唯贊生物科技有限公司先生
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您好,可以將插入片段分成兩段連接,老師可以使用我們的C113或C115,做多片段克隆(2個插入片段),引物設計可以使用我們的CE Design軟件進行設計(官網上搜索C113或C115,在說明書旁邊有軟件下載鏈接)。
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李肥
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加了RNAkeeper以后的人組織還可以做ELISA嗎?
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南京諾唯贊生物科技有限公司先生
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您好,不建議再繼續進行ELISA。
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葛文雪
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三片段無縫克隆能做嗎,共約7000bp。價格怎樣?可加微信18717709096聯系
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南京諾唯贊生物科技有限公司先生
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C113/C115可以做。老師可以告知一下院校單位嗎,我們可以安排對應業務員與您聯系。
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林娜妮
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ND608說明書中,第11頁中的連接反應低上樣量需調整接頭使用濃度,請問有大概的調整范圍嗎?500pg的上樣量大概調整多少呢?
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管理員:
南京諾唯贊生物科技有限公司先生
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您好,具體加入的接頭濃度與模板質量也有關,建議先稀釋50倍建庫,同時適當延長接頭連接時間。
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你好,你們公司的同源重組試劑盒對于轉化的感受態有什么要求嗎,stbl3這一類重組酶缺失的感受態可以用嗎
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南京諾唯贊生物科技有限公司先生
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同源重組對感受態沒有特殊要求,不過我們沒有測試過這種感受態,不確定是否可以用。推薦您使用DH5a感受態細胞或Fast-T1感受態細胞,或者您也可以申請一個試用裝,用試劑盒中的陽性對照做重組轉化到stbl3感受態細胞中,看看是否可用。
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趙老師
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河北省保定市河北農業大學西校區科研大樓
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申請EM101試用裝, 同時,請問,在進行亞硫酸氫鹽處理后,如何設計pcr引物?適宜的pcr擴增長度為多少?
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管理員:
南京諾唯贊生物科技有限公司先生
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您好,您可在我們官網上下載EM201/EM202的說明書,里面有關于引物設計的注意事項。
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黃女士
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你好,最近考慮購買支原體相關試劑,請問一下支原體檢測試劑盒 Myco-Blue Mycoplasma Detector的靈敏度是多少,最低檢測下限是多少copies/ml,實驗結果會不會假陽性?以及支原體清除試劑里的有效抗生素是什么,大概需要多久清除細胞里的支原體,以及會不會對細胞產生影響,清除之后多久可以正常進行下一步實驗呢,有沒有相關文獻參考?謝謝!
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管理員:
南京諾唯贊生物科技有限公司先生
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1ul里可以檢出至少500cfu的支原體,可以檢測3位數拷貝。假陽性這個問題,每次都做陰陽對照,陰陽對照沒有問題就不會有假陽性,但是一定注意加樣順序以及反應結束不能開蓋。D103支原體清除劑與通常使用的抗生素不同,其清除原理是通過破壞支原體的膜結構,引發支原體破裂死亡;能有效的清除抗生素耐受型支原體,?而不產生耐藥性;對于常見的革蘭氏陰性和陽性菌也有一定的抑制作用。使用本產品3-7 天,便可以完全清除細胞內和細胞外的支原體,且4 個月內無支原體的二次污染。清除后用D101檢測,檢測不出了即可進行后續實驗。
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朱傳應
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你好,ClonExpress Ultra One Step Cloning Kit(C115)試劑盒pCE-Zero vector的作用?利用你們公司提供的軟件設計引物時,用的pCE-Zero vector載體序列還是自己的表達載體序列?
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南京諾唯贊生物科技有限公司先生
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您好,pCE-Zero vector的作用是用于進行陽性對照,也可以用于做入門克隆;設計引物時需要用自己的載體。感謝您的支持~
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盛小強
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Single Cell Sequence Specific Amplification Kit,P621-01 試劑盒,單細胞擴增時是否需要加入內參基因,qpcr時還需要像提組織RNA qpcr一樣跑內參基因然后減去其CT值?我的樣本時小鼠卵母細胞,沒有設內參基因,結果和預期相差很大?是否有類似經驗,如要設內參,內參推薦一下,謝謝!
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管理員:
南京諾唯贊生物科技有限公司先生
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建議還是需要加內參的,內參選擇可以參考內參庫:http://icg.big.ac.cn/index.php/Homo_sapiens
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王婭
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請問clone express Ⅱ one step cloning kit (c112)可以將兩個DNA片段進行連接嗎?我也是加上20多個overlap
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南京諾唯贊生物科技有限公司先生
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不可以,C112不能用于將兩個短片段連成長片段,只能用于載體的構建。
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王榮華
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請問One Step Mouse Genotyping Kit(PD101-01)套裝中的Protein K濃度是多少?
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10mg/ml
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