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2 × Taq Plus Master Mix

貨  號:
P211-01/02/03
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290.00
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2 × Taq Plus Master Mix

比普通Taq 酶具有更高的擴增效率和保真度的DNA 聚合酶

加入3’→5’外切酶活性

保真度是Taq DNA Polymerase的6倍

提高擴增產量和長度

即用型的預混液,最大程度地減少實驗步驟

使用Taq Plus DNA Polymerase 分別擴增6 kb 和10 kb 的人基因組DNA 片段以及15 kb 的λDNA 片段。

M: DL15,000 DNA Marker

Taq Plus DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase與一種含有3’→5’外切酶活性(校對活性)的蛋白組成的混合酶,保真度是Taq DNA Polymerase的6倍。對于長度在5 kb以內的目的片段,與Taq DNA Polymerase相比,Taq Plus DNA Polymerase具有更強的擴增性能。一般情況下,使用Taq Plus DNA Polymerase可以得到更高的產量。有些Taq DNA Polymerase不能擴增的片段,Taq Plus DNA Polymerase可以正常擴 增。PCR產物的3’端帶A,可克隆至T載體,并適用于ClonExpress? 快速克隆試劑盒(C112/C113/C115/C601)。2 × Taq Plus Master Mix 包含Taq Plus DNA Polymerase、dNTP 以及優化的緩沖體系, 只需加入引物和模板即可進行擴增,減少了移液操作,提高了通量和結果的重現性。

組分

P211-01

P211-02 

P211-03 

2 × Taq Plus Master Mix

5×1ml

15×1ml

50×1ml

-20°C

未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

Q1:擴增效率低,實驗組無擴增條帶。

A1:(1) 引物

檢查人工合成的引物是否因存儲條件不當而降解;引物設計是否合理,可利用BLAST檢查引物特異性或重新設計引物。

(2) 模板

長期放置、反復凍融會導致模板斷裂、開環或降解,應使用新鮮制備的DNA雙鏈作為模板;模板GC含量過高會導致DNA的雙鏈無法打開,此時加入PCR Enhancer(貨號P021),可以有效降低解鏈溫度;模板的GC含量過低會導致擴增效率較差,可適當延長引物長度或通過梯度PCR摸索合適的反應條件;模板中存在抑制物,特別是甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸,會造成DNA脫嘌呤而影響PCR結果,建議稀釋使用或重新制備;若模板為cDNA,要確認逆轉錄所用RNA的純度及完整度。

(3) 酶

反應所用的酶因保存或運輸不當而失活,建議更換新酶或用另一來源的酶重新實驗。

(4) 擴增體系

反應體系配制錯誤,建議重復實驗。

(5) 反應程序

檢查變性溫度是否準確,PCR儀指示溫度與實際溫度是否相符。如果溫度過高,酶在前幾個循環就迅速失活;溫度過低則模板變性不徹底。可對退火溫度設置梯度,摸索最佳的退火溫度。檢測延伸時間是否充足。

(6) Mg2+濃度不合適

Mg2+濃度過低可影響PCR產量甚至使PCR擴增失敗;Mg2+濃度過高會降低PCR的特異性,應適當調整Mg2+濃度。

Q2:擴增特異性差,非特異性擴增。

A2:(1) 引物

引物設計不夠優化。引物與靶序列有非特異性互補或自身聚合成二聚體,可降低引物濃度進行優化,必要時重新設計引物。

(2) 模板

模板不純,被污染,需重新制備模板。

模板降解或過量,通過電泳檢查模板完整性及濃度,必要時重新純化模板。模板的使用量請參考說明書。

(3) 反應程序

反應程序不夠優化。如果出現比目的條帶小的雜帶,可通過提高退火溫度,降低循環數調整;如果出現比目的條帶大的雜帶,可縮短延伸時間、降低循環數。

(4) 酶

酶量加入過多。

Q3:擴增產物跑膠條帶彌散或拖尾。

A3:(1) 膠

制膠時要使膠完全融化。

(2) 引物

檢查人工合成的引物是否因存儲條件不當而降解。

(3) 模板

模板降解或過量,可通過電泳檢查模板完整性及濃度,必要時重新制備模板。模板的使用量請參考說明書。如果目的條帶較長,模板是cDNA,要確認逆轉錄所用RNA的純度及完整度,逆轉錄時不加隨機引物重新逆轉錄。

(d) 反應程序

反應程序不夠優化。退火溫度不合適,可對退火溫度設置梯度,摸索最佳的退火溫度;嘗試Touch Down 程序。

(e) 酶

酶量加入過多。

Q4:空白對照出現擴增產物。

A4:(1) 引物設計不合理

擴增序列與非目的擴增序列有同源性,PCR也可以擴增出非靶序列的序列。

(2) 若擴增產物條帶大小與目的條帶一致,說明有污染

更換新的Mix、水或引物重復實驗。反應體系在超凈工作臺內配制,減少氣溶膠污染。

(3) 為了避免靶序列受到整個基因組或大片段的交叉污染,操作時應小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外。

(4) 為了避免靶基因受到空氣中小片段核酸污染,可用巢式PCR方法減輕或消除污染。

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