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2 × Rapid Taq Master Mix
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2 × Rapid Taq Master Mix

貨  號:
P222-01/02/03/04
價  格:
236.00
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2 × Rapid Taq Master Mix

速度與性能,并駕齊驅

擴增速度快:15 sec/kb,1 kb 以內極限擴增速度可達1 sec/kb

操作便捷:加入引物和模板即可進行擴增,無需冰上操作,產物含有染料可直接進行電泳

穩定性好:反復凍融50 次,活性未見明顯降低

圖1.擴增速度可達1 sec/kb

以人基因組DNA、人cDNA、鼠基因組DNA、小麥基因組DNA、水稻基因組DNA、菌液、菌落、λDNA 分別為模板擴增1-2 kb 片段,延伸時間僅設置為1 sec/kb,PCR 反應結束后取10 ul 進行電泳檢測。

圖2.擴增特異性強,產量高

以人基因組和水稻基因組DNA為模板,分別擴增長度為2 kb、3.3 kb 的目的片段,延伸時間分別設置為30 s、60 s,PCR 反應結束后取10 ul 進行電泳檢測。可見2 × Rapid Taq Master Mix 具有優異的擴增性能、極高特異性和產量優勢。

本產品包含Taq DNA Polymerase、延伸促進因子、dNTP以及優化的緩沖體系,擴增速度可達15 sec/kb,適用于快速PCR反應,1 kb以內的極限擴增速度可達1 sec/kb,大幅節省PCR反應時間。預先配制的2 × Master Mix用于PCR反應時只需加入引物和模板即可進行擴增,減少了移液操作,提高了檢測通量和結果的重現性。本品擴增性能優,保存穩定性高,適用于5 kb以內以基因組為模板的PCR擴增以及10 kb 以內以質粒和λDNA為模板的PCR擴增。擴增體系中加入的保護劑使得2 × Master Mix反復凍融后仍可保持穩定活性。本品含有電泳緩沖液和綠色染料,可在反應結束后直接進行電泳,使用方便。PCR產物的3’端帶A,可直接克隆至T載體。

組分

P222-01 

P222-02 

P222-03 

P222-04

2 × Rapid Taq Master Mix

5 × 1 ml

15× 1 ml

50× 1 ml

10× 5 ml

-20℃保存;解凍后4℃可存放3個月。

未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

Q1:擴增效率低,實驗組無擴增條帶。

A1:(1) 引物

檢查人工合成的引物是否因存儲條件不當而降解;引物設計是否合理,可利用BLAST檢查引物特異性或重新設計引物。

(2) 模板

長期放置、反復凍融會導致模板斷裂、開環或降解,應使用新鮮制備的DNA雙鏈作為模板;模板GC含量過高會導致DNA的雙鏈無法打開,此時加入PCR Enhancer(貨號P021),可以有效降低解鏈溫度;模板的GC含量過低會導致擴增效率較差,可適當延長引物長度或通過梯度PCR摸索合適的反應條件;模板中存在抑制物,特別是甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸,會造成DNA脫嘌呤而影響PCR結果,建議稀釋使用或重新制備;若模板為cDNA,要確認逆轉錄所用RNA的純度及完整度。

(3) 酶

反應所用的酶因保存或運輸不當而失活,建議更換新酶或用另一來源的酶重新實驗。

(4) 擴增體系

反應體系配制錯誤,建議重復實驗。

(5) 反應程序

檢查變性溫度是否準確,PCR儀指示溫度與實際溫度是否相符。如果溫度過高,酶在前幾個循環就迅速失活;溫度過低則模板變性不徹底。可對退火溫度設置梯度,摸索最佳的退火溫度。檢測延伸時間是否充足。

(6) Mg2+濃度不合適

Mg2+濃度過低可影響PCR產量甚至使PCR擴增失敗;Mg2+濃度過高會降低PCR的特異性,應適當調整Mg2+濃度。

Q2:空白對照出現擴增產物。

A2:(1) 引物設計不合理

擴增序列與非目的擴增序列有同源性,PCR也可以擴增出非靶序列的序列。

(2) 若擴增產物條帶大小與目的條帶一致,說明有污染

更換新的Mix、水或引物重復實驗。反應體系在超凈工作臺內配制,減少氣溶膠污染。

(3) 為了避免靶序列受到整個基因組或大片段的交叉污染,操作時應小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外。

(4) 為了避免靶基因受到空氣中小片段核酸污染,可用巢式PCR方法減輕或消除污染。

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