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Discover-sc Single Cell Kit V2

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N602-02
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23220.00
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Discover-scSingle Cell Kit V2

高靈敏度: 能夠以單個細胞或者極微量的基因組樣本為模板實現全基因組無差別擴增

高覆蓋度:單細胞基因組經擴增后可達到95%以上的覆蓋度

高均一度:基于無偏好性MDA的擴增,可實現全基因組的均一擴增

高保真度:Phi29 DNA聚合酶具有優于目前絕大多數高保真酶的保真度

高產量:6-8小時的反應可以產生30-40 μg的基因組DNA

1.擴增產物的廣泛適應性

Discover-sc? Single Cell Kit V2擴增產物分布在2-100kb,平均產物長度大于20kb,廣泛適用于全基因組和外顯子測序、大片段拷貝數變異分析、微衛星分析、qPCR分析、基因芯片分析。

M:DL15000

C:單細胞基因組擴增產物

D:純化基因組擴增產物

 

 

 

 

 

2.擴增產物的高覆蓋度!高均一度!

Discover-sc? Single Cell Kit V2全基因組擴增產物均一度與覆蓋度檢測結果。

使用分布在16條不同染色體上的qPCR引物檢測Discover-scSingle Cell Kit V2全基因組擴增產物的均一度與覆蓋度,其中模板為5ng。結果顯示擴增產物的高均一度與覆蓋度。

Discover-sc? Single Cell Kit V2使用基于多重鏈置換擴增(MDA)的等溫擴增體系,可以以單個細胞或者極少量樣本為模板實現全基因組的無差別擴增。單細胞基因組經擴增后可達到95%以上的覆蓋度,擴增產物大小在2kb-100kb之間,平均產物長度大于20 kb,廣泛適用于全基因組和外顯子測序、大片段拷貝數變異分析、微衛星分析、qPCR分析、基因芯片分析。

本試劑盒使用的Phi 29 DNA聚合酶是從噬菌體中克隆的DNA聚合酶,具有很強的鏈置換活性,可以實現復雜結構的DNA解鏈與復制,并且Phi 29 DNA聚合酶具有很強的鏈親合力,單次聚合反應可以實現長達100 kb的連續聚合延伸,其擴增產物適用于幾乎所有下游應用;Phi 29 DNA聚合酶還具有很強的3’-5’外切酶活性,其保真度是Taq酶的1000倍,這保證了DNA合成的高保真性。

正常情況下Discover-sc? Single Cell KitV2一個反應可以產生30-40 μg高覆蓋度的基因組DNA。

Box1:-20°C儲存,如需更長期儲存請于-70℃以下存放;

Box2:-20°C避光儲存;

未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

1. 沒有擴增產物

A. 樣品在收集過程中丟失

重新收集樣品,確定不會因操作不當,造成樣品意外丟失。

B.基因組DNA樣本中含有反應抑制成分

純化或者稀釋DNA樣品。如果樣品純化過程中有乙醇沉淀或漂洗步驟,樣品中殘留的酒精會抑制反應,純化過程中要讓酒精充分揮發。

C.反應溫度過高

反應溫度應控制在30℃,過高的溫度會使聚合酶失活,如果使用具有熱蓋功能的PCR儀進行反應,請將熱蓋溫度設為70℃。

2.擴增產生10-40 μg DNA,但檢測到部分染色體錯位或等位基因丟失。

A.對于以基因組DNA為起始模板的反應:

基因組DNA存在降解,使用完整的DNA作為模板;使用更多量的DNA做為模板。

B.對于以細胞作為起始的反應:

細胞存在凋亡或者細胞被固定過導致DNA降解;細胞存在難以被裂解的細胞壁(如植物細胞)不適合直接作為起始材料。

3.陰性對照擴增產生10-40 μg DNA,但下游檢測結果為陰性(如qPCR)

無模板的陰性對照反應中,由引物的隨機聚合延伸產生的高分子量DNA產物,這種產物不影響目的產物的質量及下游分析。

4.陰性對照擴增產生10-40 μg DNA,且下游檢測結果為陽性(如qPCR)。

反應有交叉污染,由于本反應對微量DNA非常敏感,替換掉所有可能被DNA污染的試劑及用品。

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貨  號
N411-01/02/03
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