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Single Cell Full Length mRNA-Amplication Kit
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Single Cell Full Length mRNA-Amplication Kit

貨  號:
N712-01/02/03
價  格:
5000.00
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Single Cell Full Length mRNA-Amplication Kit

模板起始量低:單個細胞或10pg Total RNA即可作為起始模板,進行高效擴增

擴增靈敏度高:使用LNA技術及精心優化的反應體系,提高低表達基因的檢出量

產物完整性好:通過雙端引物擴增全長cDNA,獲得全轉錄組信息,避免了5'3'偏好性

 

單個293T細胞和10 pg Total RNA分別擴增18個循環,取1 μl純化后的cDNA擴增產物使用Agilent 2100 Bioanalyzer進行檢測,擴增產物分布于400-10000 bp,文庫的peak位于2000 bp 左右;無模板陰性對照無產物。

Single Cell Full Length mRNA Amplication Kit能以1-500個細胞或10 pg-10 ng總RNA為模板,以Oligo(dT) VN Primer 為逆轉錄引物進行cDNA的合成,并且利用逆轉錄酶Sc Reverse Transcriptase的Template-switching活性在cDNA的3’端添加一段接頭序列,通過該接頭序列進行后續PCR擴增以獲得全長cDNA擴增產物。有效避免了cDNA合成過程中的3’偏好性和rRNA的污染,對獲得的全長cDNA擴增產物進行測序分析可以得到基因表達差異、可變剪接、融合基因等遺傳調控信息。

Single Cell Full Length mRNA Amplication Kit ,兼容樣品體積可控制為2.5 μl。一般情況下,一個反應可以產生2-20 ng的cDNA擴增產物。

未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

Q1:單細胞轉錄組擴增時,在獲得單細胞后不立即進行擴增,細胞該如何保存?

A1:可以將細胞放入裂解液后于-70℃保存一段時間,但是不建議存放時間過長。

Q2: 單細胞轉錄組擴增出現小片段,可能原因有哪些?

A2:(1)樣本出現降解,即取樣前細胞已死亡,可嘗試重新準備樣品;

(2)樣本中引入抑制組分,如:胰酶、臺盼藍、高濃度的EDTA、巰基乙醇等。可嘗試將細胞在PBS中多清洗重懸幾次以解除抑制,或參照3情況解決;

(3)內源性RNA酶過多,在細胞裂解過程中將RNA降解,常見于免疫細胞或一些特殊的組織中。可在加入細胞樣本前,在裂解液中加入1%巰基乙醇,用RNA磁珠純化后再繼續進行后續實驗。

Q3:RNA樣本能否使用N712進行擴增?

A3:RNA進行擴增前,要進行質檢。這是因為N711試劑盒只針對帶有3’poly(A)的轉錄本進行擴增。如果RNA質量完整度不好,會丟失5’轉錄本的信息。如果RNA質量較好,可以使用N711。

Q4:DAPI染色后的活細胞能否用N712 進行轉錄組擴增?

A4:不同的試劑可能會對后續實驗有一定影響。可通過對照實驗確定DAPI試劑的影響,或將染色的活細胞在裂解后進行純化操作。

Q5:單細胞轉錄組擴增,第一鏈cDNA合成時,是否需要熱蓋?

A5:需要,沒有特別要求時,默認105°即可。

暫未實現,敬請期待
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貨  號
N411-01/02/03
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