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RNA-easy Isolation Reagent

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R701-01/02
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RNA-easy Isolation Reagent

操作簡便:單相提取,無需多相分層,并且全程可在室溫進行操作

兼容性廣:廣泛適用于各類動植物和微生物樣品,輕松應對各類培養細胞

RNA質量高:RNA純度高,完整度好,產量媲美傳統Trizol法提取

安全低毒:無需使用氯仿、β-巰基乙醇等有毒有害試劑

1.操作體驗好

 

2.兼容范圍廣

RNA-easy Isolation Reagent (Vazyme #R701)廣泛適用于從各類動物組織、植物組織、培養細胞和微生物等樣品中提取Total RNA和Small RNA。

如上圖展示,分別使用Vazyme #R701與市售Trizol產品(來自T、Ta、Ti公司),按照各自說明書對小鼠肝臟(25mg)、玉米葉(20mg)和HEK293細胞(2 × 106 個)的進行總RNA提取,并對最終獲得的RNA產物(1μg)進行瓊脂糖凝膠電泳檢測,可以看出,Vazyme #R701 提取RNA質量高,與T公司和Ta公司的Trizol處于相同水平。

 

3.RNA產量高

針對上述獲得的RNA產物使用Onedrop測定其濃度,如上圖所示,Vazyme #R701針對肝臟和玉米(葉)提取RNA產量與T公司和Ta公司處于相同水平,且超過Ti公司;針對HEK293細胞, Vazyme #R701提取產量最高(與T公司相比,P 值<0.001 )。

4.RNA質量高

如上圖展示,分別使用Vazyme #R701與市售Trizol產品,按照各自說明書對HEK293細胞(2 × 106 個)進行總RNA提取,并對最終獲得的RNA產物使用Onedrop測定OD260/280比值, 以及Agilent 2100 Bioanalyzer進行RNA完整度分析。從圖中可以看出,Vazyme #R701 提取的RNA完整度好,純度與Th公司和Ta公司處于相同水平,超過Ti公司(P 值=0.0077)。

RNA-easy Isolation Reagent 廣泛適用于從各類動物組織、植物材料、培養細胞和微生物等樣品中提取Total RNA和Small RNA。與傳統Trizol提取方法相比,本產品使用方法簡單,不需要使用氯仿進行分層,且全程可在常溫進行;此外,本產品在高效地抑制RNA酶(RNase)活性的同時,將蛋白質、DNA、多糖等雜質沉淀到管底,從而實現單相提取,并有力保證了RNA的完整度和純度。使用本產品在50 min內即可完成全部的提取過程,提取的RNA可以直接用于cDNA克隆、qRT-PCR檢測、mRNA純化、體外翻譯、Northern blotting雜交、高通量測序等各種分子生物學實驗。

2~ 8℃保存。

未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

Q1:RNA發生降解怎么辦?

A2:RNA降解可能發生在多個環節,實驗過程中需要注意以下事項:

(1)確保提取RNA的試劑和器具沒有被RNase污染,所有離心管、槍頭及相關溶液都必須無RNase污染,耐高溫器物可于150℃烘烤4 - 6 h以去除RNase,其它器物去除可用0.1%的DEPC水浸泡過夜;

(2)做好防護工作,戴口罩和一次性干凈手套,并在單獨的潔凈區操作;

(3)細胞或組織樣品需立即加入RNA-easy,并迅速進行勻漿裂解。若處理不當,發生細胞或組織凍融,RNase會被釋放出來降解RNA。針對內源RNase含量高或不易勻漿的組織,需將組織切成小塊后立即投入液氮冷凍,然后進行研磨,在整個研磨過程中,樣品不得融化。

(4)提取的RNA樣品需要妥善保存,建議取少量進行檢測,其余樣品分裝保存-85 ~ -65℃。進行電泳檢測可以提高電壓并縮短跑膠時間,同時對電泳緩沖液進行冰浴降溫,防止跑膠過程中RNA發生降解。

Q2:出現污染

A2:(1)蛋白質污染:采用分光光度計檢測提取產物OD260/OD280偏低時,提示可能存在蛋白質污染。遇到此種情況,需要考慮是否組織投入量過大,導致裂解不充分,可以適當增加RNA-easy或者降低組織投入量進行提取。

(2)多糖污染:采用分光光度計檢測提取產物OD260/OD230偏低時,提示可能存在多糖污染,需要考慮是否是因為乙醇未去除干凈或者是組織投入量過大導致,此時,可以在07-2步驟8時適當對RNA沉淀進行晾干或者適當降低組織投入量進行提取操作。

(3)脂肪污染:處理脂肪含量豐富的組織時,經過07-2步驟2之后,上層是大量脂肪,可以轉移澄清中間層進行下一步操作。

Q3:加入異丙醇離心后看不見沉淀?

A3:通常情況下,經過異丙醇沉淀可以看見白色膠狀沉淀。若遇到沉淀不可見的情況,可能是RNA含量低或者組織投入量過低,建議加入異丙醇(07-2步驟4)后在2 ~ 8℃或-30 ~ -15℃放置10 - 30 min后再離心;且在07-2步驟5進行棄上清操作時,請采用吸取而不是傾倒的方法,以免沉淀丟失。此外,部分組織材料由于含有較多的代謝產物,導致沉淀不能聚集而分散在離心管壁上,此時,請小心棄去上清,經過75%乙醇清洗RNA沉淀之后,白色團塊狀沉淀會更加聚集和明顯。

Q4:如何保存組織樣本?

A4:如果不能立刻提取RNA,應將組織離體后迅速投入液氮冷凍,并用液氮保存;或液氮速凍后,轉移至-85 ~ -65℃保存。不能直接將新鮮組織放在-85 ~ -65℃冷凍,因為樣品的凍結是一個緩慢的過程,在這個過程中內源RNase會將RNA降解。此外,針對不具備液氮速凍條件的情況,可將新鮮組織充分浸泡在RNA Keeper Tissue Stabilizer (Vazyme #R501)中,在室溫可存放一周,2 ~8℃存放一個月,或在-30 ~ -15℃/-85 ~ -65℃長期保存。

Q5:RNA-easy可以適用于什么組織/細胞樣本?

A5:RNA-easy與傳統Trizol一樣屬于通用型total RNA提取試劑,具有廣泛的物種和組織/細胞兼容性。RNA-easy 針對常規動物組織(如:肝臟、心臟、腎臟、腦組織、骨骼肌等,不包括脾臟和肺臟)、植物組織(如水稻、玉米、擬南芥、煙草、小麥、大豆等,不包括棉花)、各類細胞系均具有極佳的提取效果。

 

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