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Myco-Blue Mycoplasma Detector

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D101-01/02
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Myco-Blue?  Mycoplasma Detector

一臺水浴鍋,就可以快速完成支原體的日常檢測

取1 μl培養上清直接檢測,不需要樣品預處理

產物不需要電泳,避免出現假陽性

顏色區分明顯,無弱陽性/假陰性

準確性媲美qPCR法,優于PCR法

圖1.隨機挑選16個細胞培養物,用三種方法檢測支原體,對結果進行比較。

Myco-Blue? Mycoplasma Detector 是專門針對細胞培養物的支原體污染快速檢測試劑,其核心為Vazyme 獨特的等溫擴增技術。Myco-Blue? Mycoplasma Detector 使用非常簡便, 只需吸取1 μl 細胞培養上清加入到反應體系中,在60℃孵育1 h。若細胞培養物被支原體污染,支原體DNA 的保守序列會被等溫DNA聚合酶特異性擴增,使反應液由紫色變成天藍色,肉眼觀察, 即可判定結果。無需PCR 儀/qPCR 儀,無需電泳,在細胞房內就可以輕松完成。非常適合于生物制藥企業、疫苗生產企業、單抗生產企業、細胞治療/ 胚胎實驗室以及科研實驗室的日常支原體檢測。

組   分

D101-01 20rxn

D101-01 50rxn

Myco-BlueBuffer   

480 μl

1.2 ml

Myco-BlueEnzyme

20 μl

50 μl

Positive Control

10 μl

25 μl

石蠟油

500 μl

1.25 ml

-20℃保存

未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

Q1:如果出現支原體污染該如何補救?

A1:若發現細胞存在支原體污染,建議直接丟棄,防止污染其它細胞。同時,復蘇一支同批次凍存的細胞進行檢測。如果發現是支原體陽性,則將該批次細胞全部丟棄。如果細胞很珍貴,可嘗試使用Myco-Off支原體清除試劑(Vazyme #D103),對細胞進行挽救。

Q2:如何處理支原體嚴重污染的細胞?

A2:對于支原體嚴重污染的細胞,如果7天不能清除干凈,推薦延長處理時間。

Q3:支原體清除試劑盒,是否可以用于液氮罐清洗時去除支原體?

A3:理論上可以用于,但是用量較大,建議使用物理方法清除污染。

Q4:如何減輕支原體清除試劑對細胞的毒性。

A4:經驗證在大多數情況下,本產品對細胞幾乎無毒性,對于部分敏感細胞,若細胞出現生長緩慢,可以將試劑按1:2000進行稀釋使用。

Q5:MycoBlueTM Mycoplasma Detector的靈敏度是多少?如何保證檢測靈敏度?

A5:MycoBlueTM Mycoplasma Detector可從1 μl培養上清中準確檢出至少500 cfu的支原體,即靈敏度為5 × 105 cfu/ml。通常情況下,培養上清中的支原體含量在106-108 cfu/ml之間,該試劑可以滿足絕大多數實驗的需要。據文獻報道,單個支原體感染細胞后,在3-5天內可擴增至106 cfu/ml。因此,盡量在換液或傳代3天后再進行檢測,以使上清中的支原體含量增多,提高檢出率。

Q6:加入培養基上清后,反應液即變色;或者反應結束后,反應液顏色呈現紫色與藍色以外的顏色,是什么原因?如何解決?

A6:在極少數情況下,培養基成分會對MycoBlue試劑的顏色產生干擾,比如Cell Boost 5(Hyclone)會使MycoBlue試劑呈現出粉紅色。

處理方法:

(1) 取少量培養基上清或細胞懸液,500g離心5min,收集上清;

(2) 高速離心(>12,000g) 5 min,使上清中可能存在的支原體沉淀。棄掉大部分上清,保留約50 μl;再加入950 μl無菌水。用移液器吹打混勻;

(3) 重復步驟(2)兩次,棄掉大部分上清,保留約50 μl;

(4) 取1 μl進行檢測。

Q7:操作過程中如何避免出現假陽性?

A7:只要稍加注意,不會出現假陽性。最重要的是反應結束后,不能打開管蓋,否則反應產物會產生氣溶膠,導致后續檢測出現假陽性。另外,加樣時注意更換槍頭,并將陽性對照放在最后一管加入,也可以進一步降低假陽性出現的風險。

Q8:MycoBlueTM Mycoplasma Detector可以檢測多少種支原體?

A8:MycoBlueTM Mycoplasma Detector可以準確檢出28種支原體:

A. laidlawii*

M. salivarium*

M. neophronis

M. primatum

M. gallinarum

M. lipophilum

M. hominis*

M. pirum*

M. timone

M. leopharyngis

M. sphenisci

M. falconis

M. arginini*

M. orale*

M. caviae

M. maculosum

M. bovigenitalium

M. alkalescens

M. fermentans*

A. granularum

M. alvi

A. oculi

M. auris

 

M. hyorhinis*

A. pleciae

M. bovis

M. iners

M. columbinum

超過95%以上的細胞是被這8種支原體所污染

 

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貨  號
D103-01/02/03
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