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Blood Direct PCR Kit V2

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PD103-01/02
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Blood Direct PCR Kit V2

升級版全血直擴PCR 試劑盒

基于改造的Phanta? Blood Super-Fidelity DNA Polymerase,具有極強的擴增效率和PCR 抑制物耐受度

適用各種血液樣本,兼容常規抗凝劑

可耐受高達40% 的全血模板

可從全血中高效擴增長達7.5 kb 的基因組片段

1.廣泛的物種兼容性

分別從人、大鼠、小鼠、豬、狗、兔、雞、鳥、牛的-20℃存儲的肝素抗凝全血中擴增237 bp的DNA片段。所有血樣的血液模板使用濃度為10%。其中NTC:No Template Control;PC:Positive Control,使用純化過的人基因組DNA 作為擴增模板。PCR 反應結束后進行PCR 電泳檢測。以質粒為模板,primer pair 1和primer pair 2為引物,分別擴增兩段大小均為690 bp,GC含量均為72%的片段。結果顯示,只有加入PCR Enhancer的實驗組才能擴增出如圖所示的目的片段。

2.優秀的擴增性能

以人-20℃存儲的肝素抗凝血為模板,擴增不同長度DNA片段。PCR結束后電泳顯示,Blood Direct PCR Kit V2可以高效擴增長達7.5 kb的片段。

Blood direct PCR Kit V2可以直接對全血樣本進行PCR,無需進行DNA 純化或樣品預處理。可用于直接擴增的血樣類型包括:新鮮血液、4℃貯存血液、冷凍血液以及儲存在Whatman 903? 和FTA? 商用卡上的干血漬,且兼容所有常規抗凝劑(EDTA、檸檬酸鹽、肝素等)。試劑盒中包含Phanta? Blood Super-Fidelity DNA Polymerase,該酶對全血樣品中的PCR 抑制劑具有超強的抵抗力,可擴增全血濃度高達40%。配以精心優化的2 × Phanta? Blood Buffer,Blood Direct PCR Kit 能夠從全血樣品中高效擴增長達7.5 kb的基因組片段。試劑盒配有與哺乳動物和其他許多脊椎動物兼容的引物預混液Positive control primer mix,可用于進行陽性對照反應。

組 分

PD103-01

PD103-02

Phanta Blood Super-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μl)

75 μl

300μl

2 × Phanta Blood Buffer V2

1.25 ml

1.25 ml × 4

Positive control primer mix (10 μM each)

50 μl

50 μl

10 mM each dNTPs

50 μl

200 μl

10 × Loading buffer

1.25 ml

1.25 ml

-20℃保存

未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

Q1:無擴增產物或者產物量很少。

A1:(1) 核對引物設計,確認引物的純度和濃度。

(2) 重復實驗,確認反應體系配制、反應程序設置無誤。

(3) 增加循環數。

(4) 提高Mg2+ 濃度。

(5) 優化退火溫度。

(6) 嘗試不同的血液用量。

Q2:產物呈現高分子量彌散條帶。

A2:(1) 擴增樣品電泳檢測前離心取上清。

(2) 延伸時間不應超過60 sec/kb。

(3) 優化退火溫度。

(4) 嘗試不同的血液用量。

(5) 減少總循環數。

(6) 降低引物濃度。

Q3: 產物呈現低分子量分散帶。

A3:(1) 擴增樣品電泳檢測前離心取上清;

(2) 提高退火溫度;

(3) 嘗試不同的血液用量;

(4) 降低引物濃度;

(5) 減少總循環數;

(6) 重新設計引物。

Q4: 全血擴增引物設計注意事項。

A4:(1) 引物3’端最后一個堿基選擇C或G。

(2) 引物3’端最后8個堿基應避免出現連續錯配。

(3) 引物3’端盡量避免出現發夾結構。

(4) 引物Tm值控制在60℃-72℃之間(推薦使用軟件Primer Premier 5進行計算)。

(5) 引物額外附加序列,即與模板非配對序列,不應參與引物Tm值計算。

(6) 引物GC含量控制在40%-60%之間。

(7) 正向引物和反向引物Tm值以及GC含量盡可能一致。

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貨  號
G102
貨  號
G103
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