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One Step U + Probe Mouse Genotyping Kit
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One Step U + Probe Mouse Genotyping Kit

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PD104-01
價  格:
1500.00
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One Step U + Probe Mouse Genotyping Kit

基于 UDG 防污染探針法 qPCR 的快速基因分型檢測試劑盒

可對動物組織進行快速處理。

短暫加熱后的裂解液直接作為模板進行基于熱敏感UDG防污染的雙探針法定量PCR檢測,對應基因型可直接由儀器軟件輸出,避免人工核對數據引入錯誤。

操作簡單便利,有效防止移液污染及DNA氣溶膠污染。

以FAM和HEX分別標記等位基因上的野生型對應探針和突變型對應探針,對純合、雜合及野生型小鼠進行探針法Genotyping,得到如上直方圖,對應小鼠基因型可由儀器直接輸出。

本試劑盒包含整套的DNA粗提取以及優化的AceQ? U + Probe Master Mix和高低濃度的校正用ROX溶液。適用于基于雙探針熒光定量PCR體系的小鼠基因型快速鑒定 (Rapid Genotyping)。可用于從小鼠尾巴、耳朵以及腳趾等組織中快速釋放基因組DNA,產物直接進行qPCR擴增,避免多次開蓋移液等操作,基因型結果直接由軟件分析得出,避免人工核對輸入引入錯誤,并能極大縮短實驗耗時。試劑盒中配備優化的防污染探針法qPCR Master Mix,試劑中引入的 dUTP/UDG防污染系統可在室溫下將含U的污染物迅速降解,完全消除擴增產物產生的氣溶膠對其它qPCR反應的影響。使用方便,反應時只需加入適量水、引物、模板和探針即可進行擴增,顯著降低氣溶膠污染并提高檢測通量和結果的重現性。

組分

PD104-01

1 × Mouse tissue Lysis Buffer

2 x 20 ml

Proteinase K

800 μl

2 × AceQ U+ Probe Master Mix

2 x 1.25 ml

50 × ROX Reference Dye 1

100 μl

50 × ROX Reference Dye 2

100 μl

1 x Mouse tissue Lysis Buffer 4℃保存;

其余組分-20℃保存。

未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

Q1:消化組織過大、消化時間過長對體系的影響。

A1:請參照說明書的推薦組織用量和消化時間進行組織的消化處理。一般推薦大小的組織消化20分鐘可得到1-2ng/μl的DNA濃度。消化組織過大及消化時間過長會引起體系中雜質成分的大量增加,影響后續的qPCR反應,一般推薦大小的小鼠組織消化時間在10-20分鐘能得到較好的擴增效果。小鼠組織重量超過0.01g或適合大小的組織經過消化6小時以上的消化液將不再適合作為后續的qPCR反應檢測模板。

Q2:消化組織過小、消化時間過短對體系的影響。

A2:用于消化組織過小(少于0.0005g)、或正常大小組織消化時間過短(少于5分鐘)將可能無法釋放足量的DNA作為模板用于后續擴增,擅自增加PCR體系中模板的體積以期增加模板量會帶入不適合的鹽離子,不推薦用于該快速探針法qPCR反應。

Q3:無模板樣品的作用。

A3:是否設定無模板樣品不會影響軟件對結果分析的判斷,建議在實驗體系尚未完全成熟的條件下每次實驗設定一個無模板樣品,可有效判斷體系污染、擴增特異性差等潛在問題,在成熟的檢測體系中可以考慮舍去無模板樣品的設定。

Q4:濃度差異導致的不識別。

A4:同一次定量分型實驗中如果不同樣品的DNA濃度差異過大(如個別點有超過3個及以上的CT值差異),該點極有可能不能被系統正確判斷。因此一個批次用于檢測的DNA樣品的濃度應盡量一致,即原始組織樣品內容及大小一致、消化處理時間一致,可以得到基本一致的基因組濃度。需要將不同批次濃度可能有較大差異的模板在一個反應內時行的,應提前將模板按照預期可能存在的濃度差異進行稀釋調整,以達到最佳的可分析效果。

Q5:兩套引物擴增效率差異導致的不識別。

A5:針對兩個基因型定制的兩套引物可能存在潛在的互相影響,擴增效率的差異可能產生軟件對于雜合子基因型的誤判,設計引物時應考慮到這一影響因素,并在實驗開展前先進行單引物/探針體系的擴增效率測定,使兩個引物/探針體系有接近的擴增效率,對于雜合子來說擴增曲線應盡量重合。

Q6:在一次上機反應中鑒定不同基因的實驗需要分別分析。

A6:在一個上機反應中完全可以完成針對不同目的基因的不同引物/探針體系的實驗,結果不會互相干擾。但需要注意加樣時區分不同目的基因的模板加樣孔區域,分析時正確圈中所有同一目的基因的樣品孔進行結果分析。

Q7:一組實驗中不完全包括野生型、突變純合和突變雜合導致分析結果錯誤。

A7:一組實驗中不完全包括野生型、突變純合和突變雜合三種完整的基因型搭配會導致軟件不能判斷(全部為unidentified)或錯誤判斷樣品的基因型(如在缺少野生型對照的條件下把雜合判斷為野生),因此一次實驗中必須包含全部三種基因型樣品,如果不能預期是否全部包含,則應另外設定確定基因型的對照孔以保證軟件對未知樣品的正確判斷。

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