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Plant Direct PCR Kit

貨  號:
PD105-01/02
價  格:
600.00
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Plant Direct PCR Kit

高效的植物直擴試劑盒

獨特的超強耐受DNA聚合酶:經過定向進化改造的直擴DNA 聚合酶,對植物中的PCR 抑制物具有極強的耐受性,同時保持了極高的擴增性能。

寬廣的樣本兼容性:適合各種常見植物葉片及種子粗品的擴增。

極高的穩定性:反復凍融50 次活性未見明顯降低。

操作便捷:無需繁瑣的DNA 提取步驟,使用少量葉片或簡單裂解,即可進行PCR,節約大量時間。

以研磨法所得煙草葉片粗品、擬南芥葉片粗品、小麥葉片粗品、水稻葉片粗品及玉米種子粗品為模板,同時以CTAB法提取的上述五種植物基因組DNA為對照,使用2 × Plant Direct Master Mix分別擴增長度為0.5 kb、2.0 kb、0.3 kb、1.5 kb、2.3 kb、0.8 kb、0.3 kb的7個不同目的片段,均可成功擴增。可見2 × Plant Direct Master Mix 寬廣的樣本兼容性及超強的抑制劑耐受性。

本產品適用于對植物葉片、種子等進行直接擴增,可用于非多糖、多酚類植物樣品高通量篩選。經過定向進化改造的直擴DNA 聚合酶,對植物中的PCR抑制物具有極強的耐受性,同時保持了極高的擴增性能,適用于5 kb以內DNA 片段的擴增;試劑盒中的獨特裂解緩沖液A可用于裂解新鮮或凍存的植物組織,操作簡單,所得裂解物無需純化即可作為擴增模板。裂解液中加入的保護劑使得粗品多次凍融后仍可有效擴增。預先配置的2 × Plant Direct Master Mix只需加入引物和模板即可進行擴增反應,減少了移液操作,提高了檢測通量和結果的重現性。擴增產物為平末端,適用于ClonExpress? 和TOPOTM 快速克隆試劑盒(C112/C113/C115/C601)。

組 分

PD105-01 50 rxn (50 μl/rxn)

PD105-02 200 rxn (50 μl/rxn)

2 × Plant Direct Master Mix

1.25 ml

4×1.25 ml

Plant Direct Lysis Buffer A

5 ml

20 ml

Plant Direct Lysis Buffer B

5 ml

20 ml

2 × Plant Direct Master Mix 置于-20℃保存;

Plant Direct Lysis Buffer 可置于-20℃或2-8℃保存

未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

Q1:使用植物葉片作為樣本時如何處理樣品?

A1:推薦使用50μl反應體系并使用直徑大小為0.5-3mm的幼嫩葉片。較小反應體系和過多的葉片使用量容易導致擴增失敗。

Q2:使用植物粗品作為樣本時如何處理樣品?

A2:可通過調整粗品處理方式和使用量來獲得更優擴增效果。可嘗試將Plant Direct Lysis Buffer A中的樣本搗碎后于室溫孵育3min;將加入的模板在0.5-5μl之間調整,或將粗品按1:1-1:10的比例進行稀釋后,取1μl作為模板;需注意的是,植物樣本和粗品中存在PCR反應抑制成分,加入過多模板容易一致反應導致擴增失敗。對于難以擴增的樣本,可嘗試在Plant Direct Lysis Buffer A中加入終濃度為2%的β-巰基乙醇或10mM的DTT

Q3:無產物或產物量少。

A3:(1) 核對引物設計,確認引物的純度和濃度。

(2) 重復實驗,確認反應體系配制、反應程序設置無誤。

(3) 增加循環數,或延長延伸時間。

(4) 提高Mg2+ 濃度。

(5) 設置退火溫度梯度,找到合適的退火溫度。

(6) 嘗試不同的模板用量,增大反應體積或嘗試使用BME/DTT。

Q4:有雜帶或彌散條帶。

A4:(1) 優化引物設計,降低引物濃度。

(2) 嘗試提高退火溫度或設置退火溫度梯度,減少退火時間。

(3) 減少總循環數,延長時間不超過60sec/kb。

(4) 嘗試不同的模板用量,增大反應體積或嘗試使用BME/DTT。

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貨  號
PD101-01
貨  號
PD103-01/02
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