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高敏型ECL 化學發光檢測試劑盒( 即用型)
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高敏型ECL 化學發光檢測試劑盒( 即用型)

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E412-01/02
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高敏型ECL 化學發光檢測試劑盒( 即用型)

靈敏,鎖定你的目的蛋白

高質量的Western 顯影試劑

優化的配方,增強發光強度

抗淬滅能力強

兼容膠片曝光和CCD 掃描

圖1. 不同品牌的ECL試劑進行Western檢測結果

本實驗設置了4個不同濃度梯度的蛋白質,Vazyme的高敏型ECL化學發光試劑的檢測靈敏度、發光強度、持久性均顯著優于競品試劑。

圖2. 不同品牌的ECL試劑進行Western檢測結果

由于T公司和B公司的試劑檢測靈敏度比較低,本實驗設置了3個不同濃度梯度的蛋白質,Vazyme的高敏型ECL化學發光試劑的檢測靈敏度、發光強度、持久性均顯著優于競品試劑,而且B公司極超敏試劑的背景值很高,影響觀察結果。

本試劑盒以化學發光方法檢測蛋白質或核酸類生物大分子。蛋白質或核酸類生物大分子在電泳后轉移到印跡膜上,分別用一抗和辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP) 標記的二抗順序結合膜上的目的蛋白;或以HRP 標記的探針直接或間接結合膜上的目的核酸。洗膜后用新鮮配制的ECL 工作液,在室溫下避光孵育膜2 min-3 min,將印跡膜用保鮮膜包被粘貼固定于X 光片曝光暗盒,然后轉入暗室將X 光膠片壓在膜上曝光時長可為數秒到數小時。顯影定影后蛋白質或核酸條帶可清晰顯示在X 光膠片上,也可不進行X光膠片曝光顯影步驟,直接對印跡膜進行CCD 掃描。本試劑盒采用了獨特的發光底物系統,有效降低曝光背景、提高檢測靈敏度,并在檢測持久性和信噪比方面與ECL 增強型發光試劑盒(Vazyme #E411) 相比有顯著改善。

組分

E412-01 (2×50 ml)

E412-02 (2×250 ml)

ECL Substrate A

50 ml

250 ml

Peroxide Solution B

50 ml

250 ml

2-8℃避光保存。如果長期不用,可以-20℃避光保存

未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

Q1:ECL能否不壓膠直接照。

A1:如果使用凝膠成像儀,可以直接找。

Q2:ECL工作液怎么配置?雙蒸水可以用ddH2O代替么?有試用裝么?可以不用X光片嗎?

A2:(1) 新鮮配制ECL工作液:Buffer A和Buffer B按1:1混合后,用雙蒸水10倍稀釋,即為ECL工作液。須立即使用;

(2) 雙蒸水:兩次蒸餾冷凝的水;ddH2O:就是二次蒸餾水;

(3) 沒有試用裝;

(4) 建議老師按說明書的來,直接放到儀器里面曝光也是可以的(把western的膜有蛋白的那面朝上,放在拍照的儀器里面,然后把A液B液等體積混勻,滴加在膜上,使溶液覆蓋整個膜,拍照)。

Q3:ECL使用注意事項。

A3:(1) ECL工作液配制過程中吸取ECL Substrate A 液和Peroxide Solution B液時務必更換吸頭,工作液新鮮配制后應立即使用,室溫放置數 小時后仍可使用但靈敏度略有降低。

(2) Peroxide Solution B液含有氧化劑,易被還原而失效。各溶液使用后,請蓋緊瓶蓋,以防失效。

(3) ECL發光液是HRP的顯色底物,因此檢測系統最終必須基于HRP酶標記抗體或者核酸探針。 

(4) 盡量避免將多張膜置于同一個洗膜盒內洗膜,相互吸附或摩擦可能造成背景增加。

(5) 應使用高質量保鮮膜。質量較差的保鮮膜可能會淬滅熒光或由于含有雜質而污染印跡膜造成曝光背景值偏高。

(6) 根據目的蛋白豐度不同,曝光時間可能是數秒至數小時。曝光時間不足會導致目的條帶不明確,曝光時間過長會使背景加深。

(7) 疊氮化鈉(NaN3)能抑制HRP活性,若回收HRP標記探針或者抗體應避免使用NaN3,如必需使用勿超過0.01%。 

(8) 由于發光液極其靈敏,推薦大多數進口抗體起始濃度為一抗1:1000-1:4000,二抗1:2000-1:5000。抗體濃度過高可能造成高背景或沒有 條帶。

(9) ECL Substrate A液和Peroxide Solution B液均對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。為了您的 安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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