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AceQ Universal U+ Probe Master Mix V2

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Q513-02/03
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1650.00
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AceQ? Universal U+ Probe Master Mix V2

基于 Heat-labile UDG 防污染的通用型探針法定量 PCR 檢測試劑盒

卓越的擴增靈敏度:嚴謹的化學法熱啟動酶 Acetaq?DNA Polymerase,配合精心優化的緩沖體系,可以檢測出低至單拷貝模板

優秀的線性關系:在寬廣的模板區間內具有良好的線性關系,擴增效率高達 99%

dUTP/UDG 防污染系統:引入 Heat-Labile UDG 防污染體系, Heat-labile UDG 在室溫下即可將含 U 的污染物迅速降解,完全消除了擴增產物污染對 qPCR 反應的影響

廣泛的平臺適用性:特殊的 ROX 參比染料,適用于所有 qPCR 儀,無需在不同的 QPCR 儀器上調整 ROX 濃度

圖1.優秀的線性關系

以質粒 Puc57-Kan 為模板,進行 7 個 10 倍梯度稀釋,第 7 個稀釋梯度中質粒拷貝數濃度約為 8 copies/4 μl。使用 AceQ? Universal U + Probe Master Mix V2(Vazyme #Q513)對各稀釋梯度中的 Puc57-Kan 進行檢測,每孔模板使用量為 4 μl。可以看到,Vazyme #Q513 預混液在寬廣的模板量區間內具有優秀的線性關系,可以輕松檢測出個位數拷貝的待測模板。

圖2.dUTP/Heat-labile UDG 防污染系統

AceQ ? Universal U + Probe Master Mix V2 (Vazyme #Q513)引入 dUTP/ Heat-labile UDG 防污染系統,室溫條件下即可有效清除體系中存在的污染物,同時當反應體系升溫至 50℃-55℃時,Heat-labile UDG 迅速徹底失活,可維持 cDNA 的完整性,確保檢測靈敏度不受影響。在反應體系內分別添加 4 /40 /400 pg 的含 U 模板,測試 Vazyme#Q513 預混液對污染模板的清除效率。結果可見,Vazyme#Q513 預混液對污染模板的清除效率高達 99.6% 以上,可有效保證實驗結果的準確度。

圖3.廣泛的平臺適用性

以 HeLa 細胞 cDNA 為模板,進行 3 個 10 倍梯度稀釋,使用AceQ ? Universal U + Probe Master Mix V2 (Vazyme #Q513)在 不 同 類 型 qPCR 儀 ( 機 型:StepOnePlusTM 、LightCycler96、QuantStudioTM 6) 上擴增不同稀釋梯度 cDNA 的 GAPDH基因,定量結果優秀。說明 Vazyme #Q513 預混液儀器適用性廣,無需針對不同儀器調整 ROX 濃度。

AceQ?Universal U+ Probe Master Mix V2 采用嚴謹的化學修飾 Acetaq, 配合精心優化的緩沖體系,能夠極大程度提高探針法定量的靈敏度。 AceQ?Universal U+ Probe Master Mix V2 添加了dUTP/UDG 防污染系統,降低因探針法的高靈敏度造成的假陽性, 最大限度保證了結果的真實性。同時, AceQ?Universal U+ Probe Master Mix V2 還采用了特殊的 ROX Passive Reference Dye,適用于所有的 qPCR 儀,無需調整ROX 濃度,使用方便。

組分

Q513-02

500 rxn/20 μl reaction

Q513-03

2,500 rxn/20 μl reaction

AceQ? Universal U+ Probe Master Mix V2*

4x1.25 ml

5xQ513-02

*包含dNTP/dUTP Mix,Mg 2+ ,AceTaq?DNA Polymerase,Heat-labile UDG,Specific ROX ReferenceDye。

- 20℃避光保存

未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

1.絕對定量標準曲線線性關系不佳

a) 加樣誤差:加大模板稀釋倍數,提高加樣體積

b) 標準品降解:重新制備標準品,重復實驗

c) 模板濃度太高:增加模板稀釋倍數

2.在定量時,如何判斷cDNA 投入量

首次得到的cDNA 需要進行多個梯度稀釋, 將不同梯度稀釋的cDNA 進行qPCR 定量, 選取CT 值落在18-28,或者15-33 范圍內的擴增曲線對應的cDNA 的稀釋梯度作為后續該基因的參考稀釋度。(CT 值在18-28,或者15-33 區間范圍被認為是準確的 )    

3.如何確定基因表達量高低

如果基因擴增CT 值超過30,使用PCR 產物通過梯度稀釋創建標準曲線,判斷該引物擴增效率,若擴增效率滿足90-120%,則可以判斷該基因擴增CT 值偏大是由于基因表達量低所致

4.陰性對照出現明顯擴增

a) 反應體系污染:更換新的Mix、水、引物重復實驗。反應體系在超凈工作臺內配制,減少氣溶膠污染

b) 引物二聚體的出現:配合融解曲線進行分析

5.CT 值出現太晚

a) 擴增效率極低:優化反應條件,嘗試三步法擴增程序,或者重新設計合成引物

b) 模板濃度太低:減少稀釋度重復實驗,一般未知濃度的樣品先從最高濃度做起

c) 模板降解:重新制備模板,重復實驗

d) PCR 產物太長:推薦PCR 產物長度為80 bp-150 bp

e) 體系中存在PCR 抑制劑:一般為模板帶入,加大模板稀釋倍數或者重新制備模板重復實驗

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