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ChamQ SYBR qPCR Master Mix (High ROX Premixed)
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ChamQ SYBR qPCR Master Mix (High ROX Premixed)

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Q341-02/03
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ChamQTMSYBR?qPCR Master Mix(High ROX Premixed)

高靈敏性染料法定量PCR 檢測試劑盒

高效熱啟動酶:新型抗體法熱啟動酶Champagne TaqTM DNA Polymerase,擴增能力強、靈敏度高

擴增高度特異:專利特異性促進因子ExactorTM,最大程度抑制非特異擴增和引物二聚體

擴增性能優異:提供5-35的寬廣線性范圍和個位數拷貝的檢測靈敏度擴增穩定、定量結果具有高度重復性

 

圖1. 廣闊的定量域 

以HeLa 細胞cDNA 為稀釋液,將pUC19 質粒進行8 個10 倍梯度稀釋,第8 個稀釋梯度中質粒拷貝數濃度約為5 copies/4 μl。使用ChamQTM 預混液對各稀釋梯度中的pUC19 質粒進行檢測,每孔模板使用量為4 μl。可以看到,ChamQ TM 預混液在寬廣的模板量區間內具有優秀的線性關系,可輕松檢測出個位數拷貝的待測模板。

 

圖2. 精準的分辨力

以HeLa 細胞cDNA 原液以及10 個兩倍稀釋梯度共計11 個樣品為模板,使用ChamQTM 預混液檢測P450C17 基因的表達,每個模板設置6 個復孔。可以看到,ChamQTM 預混液可以在寬廣的范圍內精確分辨2 倍的模板濃度差異,且擴增高度特異。統計結果顯示,各稀釋度之間的平均△CT 為1.09,SD 值僅為0.08。

 

圖3. 卓越的特異性 

以HeLa 細胞cDNA 為模板,使用ChamQTM 預混液隨機測試48個基因,用以檢測擴增特異性。通過對融解曲線分析可知,48 個體系中ChamQTM 預混液可完成46 個(95%) 目標基因檢測,說明ChamQTM 預混液擁有卓越的特異性。

ChamQTM SYBR? qPCR Master Mix 采用的Champagne TaqTM  DNA Polymerase 是一種新型的抗體法熱啟動聚合酶,具有兼容性廣、擴增性能強、靈敏度高等諸多優點,配以Vazyme 獨有的專利特異性促進因子ExactorTM,完美的平衡了擴增特異性和擴增效率之間的矛盾。在不失擴增特異性的同時,ChamQTM 檢測體系可以輕松檢測到個位數拷貝的基因表達,對目標基因定量準確可信。

組分

Q341-02 (500 rxn/20 μl reaction)

Q341-03 (2,500 rxn/20 μl reaction)

2 × ChamQ SYBR qPCR Master Mix (High ROX Premixed) a

1.25 ml × 4

Q341-02 × 5

a. 包含dNTP,Mg 2+ ,Champagne Taq DNA Polymerase,SYBR Green I ,ROX Reference Dye 1等。

- 20℃避光保存

 
未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

1.絕對定量標準曲線線性關系不佳

a) 加樣誤差:加大模板稀釋倍數,提高加樣體積。

b) 標準品降解:重新制備標準品,重復實驗。

c) 模板濃度太高:增加模板稀釋倍數。

2.在定量時,如何判斷cDNA 投入量

首次得到的cDNA 需要進行多個梯度稀釋,將不同梯度稀釋的cDNA 進行qPCR 定量,選取CT 值落在18-28,或者15-33 范圍內的擴增曲線對應的cDNA 的稀釋梯度作為后續該基因的參考稀釋度。(CT 值在18-28,或者15-33 區間范圍被認為是準確的)   

3.如何確定基因表達量高低

如果基因擴增CT 值超過30,使用PCR 產物通過梯度稀釋創建標準曲線,判斷該引物擴增效率,若擴增效率滿足90-120%,則可以判斷該基因擴增CT 值偏大是由于基因表達量低所致。

4.陰性對照出現明顯擴增

a) 反應體系污染:更換新的Mix、水、引物重復實驗。反應體系在超凈工作臺內配制,減少氣溶膠污染。

b) 引物二聚體的出現:配合融解曲線進行分析。

5.融解曲線出現多峰

a) 引物設計不優:根據設計原則設計合成新的引物。

b) 引物濃度太高:適當降低引物濃度。

c) cDNA 模板帶有基因組污染:重新制備cDNA 模板。

6.CT 值出現太晚

a) 擴增效率極低:優化反應條件,嘗試三步法擴增程序,或者重新設計合成引物。

b) 模板濃度太低:減少稀釋度重復實驗,一般未知濃度的樣品先從最高濃度做起。

c) 模板降解:重新制備模板,重復實驗。

d) PCR 產物太長:推薦PCR 產物長度為80 bp-150 bp。

e) 體系中存在PCR 抑制劑:一般為模板帶入,加大模板稀釋倍數或者重新制備模板重復實驗。

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